Inhibition constitutive des protéases à cystéines pour une accumulation accrue des protéines recombinantes chez Nicotiana benthamiana

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L'un des systèmes actuels permettant la production de protéines d'intérêt médical repose sur l'expression transitoire dans l'hôte végétal *Nicotiana benthamiana*. Malgré des avantages sur le plan du rendement en protéines recombinantes, des défis liés à la dégradation des protéines exprimées par les protéases endogènes subsistent pour ce système. Différentes approches ont été proposées pour limiter l'impact de ces enzymes, incluant la co-expression transitoire d'inhibiteurs de protéases pour la protection *in situ* des protéines pendant leur synthèse. Comme alternative à cette approche, ce projet avait pour but le développement de lignées transgéniques de *N. benthamiana* montrant une charge réduite en protéases favorable à une meilleure accumulation des protéines exprimées transitoirement. Notre approche a consisté à développer des lignées modifiées de l'hôte exprimant, séparément ou en fusion, deux inhibiteurs de protéases à cystéines, la cystatine de tomate SlCYS8 (*Solanum lycopersicum*) et la macrocypine Mcp4 du champignon comestible *Macrolepiota procera*. L'idée était de déterminer si ces inhibiteurs exprimés dans la plante pouvaient permettre l'accumulation accrue d'une protéine sensible à la protéolyse, l'anticorps monoclonal C5-1, dans le tissu foliaire. Les objectifs du projet étaient (**1**) de générer des lignées transgéniques exprimant SlCYS8 ou Mcp4 de manière constitutive, seul ou en fusion, puis (**2**) d'évaluer le taux d'accumulation de la chaîne légère de l'anticorps recombinant, LC•C5-1, exprimée transitoirement. Nos travaux ont permis de mesurer une accumulation accrue de LC•C5-1 dans les feuilles exprimant Mcp4 ou la fusion SlCYS8-Mcp4. Chez les lignées SlCYS8, un phénomène compensatoire se traduisant par l'expression de protéases insensibles a été observé, avec pour conséquence un effet nul de l'inhibiteur SlCYS8 sur le rendement net en LC•C5-1. Ces résultats suggèrent le potentiel des lignées exprimant Mcp4 et SlCYS8-Mcp4 de manière constitutive pour protéger les protéines recombinantes exprimées transitoirement chez *N. benthamiana*.