31 janvier 2018
Ce document est lié à :
https://ejournals.epublishing.ekt.gr/index.php/jhv [...]
Copyright (c) 2018 E VAINAS, U BESENFELDER, V CHRISTODOULOU, B KUEHHOLZER,, GS AMIRIDIS, S BELIBASAKI, G BREM , https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0
VAINAS (Ε. ΒΑΪΝΑΣ) E. et al., « Παραγωγή διαγονιδιακών προβάτων: Μικροέγχυση της γονιδιακής κατασκευής Ρ77 (pas1-καζεΐνη- χυμοζίνη) των βοοειδών σε ζυγωτά-έμβρυα προβάτων φυλής Χίου », eJournals, ID : 10670/1.0zqqvo
Στην εργασία αυτή μελετήθηκε η δυνατότητα ενσωμάτωσης της γονιδιακής κατασκευής Ρ77 των βοοειδών σε ζυγωτά και έμβρυα δυο κυττάρων προβάτων φυλής Χίου. Η γονιδιακή κατασκευή Ρ77 των βοοειδών περιλαμβάνει 2,9 kb από τον προαγωγέα του γονιδίου της α8 1 - καζεΐνης που συγχωνεύθηκαν με το γονίδιο της χυμοζίνης ανάμεσα στο 2 και 9 εξονιο. Η έγχυση της γονιδιακής κατασκευής έγινε με μικροχειριστήριο υπό παρατήρηση σε ανάστροφο μικροσκόπιο σε έναν από τους δυο προπυρήνες του ζυγωτοΰ ή στον πυρήνα του ενός βλαστομεριδίου του εμβρύου. Σε κάθε πυρήνα έγινε μικροέγχυση διαλύματος 1 pi, το οποίο περιείχε περίπου 1000 αντίγραφα της αλληλουχίας DNA. Χρησιμοποιήθηκαν συνολικά 193 ζυγωτά και 87 έμβρυα δυο κυττάρων, τα οποία συλλέχθηκαν από 49 προβατίνες δότες φυλής Χίου. Τα 175 ζυγωτά και τα 76 έμβρυα δυο κυττάρων, στα οποία η μικροέγχυση διενεργήθηκε με επιτυχία, μεταφέρθηκαν με λαπαροσκοπικές τεχνικές στους ωαγωγοΰς 68 προβατίνων δεκτών μετά από in vitro καλλιέργεια 1-5 ωρών. Οι 22 (32,4%) από τις προβατίνες δέκτες γέννησαν 29 αρνιά που αντιστοιχούν στο 11,6% του συνόλου των ζυγωτών - εμβρύων που μεταφέρθηκαν. Η ανάλυση της γενετικής σύστασης των αρνιών που γεννήθηκαν έγινε με τεχνικές PCR σε δείγματα δέρματος. Σε ένα θηλυκό αρνί διαπιστώθηκε ενσωμάτωση της γονιδιακής κατασκευής Ρ77 των βοοειδών στο γονιδίωμά του. Η ανάπτυξη και ενήβωση του διαγονιδιακοΰ αρνιού είναι φυσιολογική, βρίσκεται δε σε κατάσταση εγκυμοσύνης, η οποία εξελίσσεται φυσιολογικά. Είναι το πρώτο διαγονιδιακό παραγωγικό ζώο που γεννήθηκε στην Ελλάδα.