Clonamiento, expresión y seroreactividad del antígeno recombinante flagelina de Bartonella bacilliformes

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Objetivos. Clonar el gen de la flagelina A (flaA) de Bartonella bacilliformis, expresar y evaluar preliminarmente laseroreactividad de la proteína recombinante a sueros de pacientes con Bartonelosis por B. bacilliformis. Materialesy Métodos. Se diseñó una pareja de oligonucleótidos iniciadores –BbFlaA1 y BbFlaA2– para la amplificación delgen completo de la flagelina flaA de B. bacilliformis. El producto de amplificación obtenido se clonó en pGEM y luegose subclonó en el vector de expresión pGEX4T-1. Se indujo la expresión de la proteína de fusión rBbFlaA-GST conisopropil tio-β-D-galactosido (IPTG). La proteína de fusión producida fue digerida con trombina para liberarla de GST.Finalmente, una prueba de ELISA fue estandarizada para detectar los anticuerpos IgG contra la proteína de fusiónrBbFlaA-GST y rBbflaA libre de GST. Se evaluaron sueros de pacientes con diagnóstico de Bartonelosis por B. bacilliformis(n= 30), sueros de individuos sanos (n= 20) y sueros de pacientes con otras enfermedades de posible reactividadcruzada; entre ellas, Brucelosis (n= 3), leptospirosis (n= 3) y salmonelosis (n=7). Resultados. Se determinó quepara la expresión óptima en E. coli BL21 de la proteína de fusión rBbFlaA se requiere que el cultivo crezca en caldoLB/ampicilina a 30 °C suplementado con 2% de glucosa a partir de un preinóculo de 100 µL (crecido por toda lanoche), hasta que alcance una densidad óptica de 1 OD600 y se induzca por dos horas con 2,5 mM de IPTG. Finalmente,el 57,6 % (17 de 30) sueros de pacientes con diagnóstico confirmado de bartonelosis reaccionaron con la proteínarecombinante BbFlaA en el formato de ELISA. Conclusiones. Se logró expresar exitosamente en E. coli la proteínarecombinante BbFlaA de B. bacilliformis, determinándose un protocolo de expresión y de purificación de rBbFlaApara la producción de esta proteína. Así también, el antígeno rBbFlaA es reconocido por anticuerpos de sueros depacientes con Bartonelosis causada por B. bacilliformis.